过氧化氢酶(Catalase，CAT)又称触酶，是一类以铁卟啉为辅基的结合酶，由四个相同亚单位组成的四聚体酶，共含4分子的亚铁血红素作为辅基，分子量约为24KD。CAT能将细胞代谢产生的毒性物质过氧化氢迅速清除，可与GSH-Px共同保护巯基酶、膜蛋白、过氧化氢解离。

Leagene 过氧化氢酶(CAT)检测试剂盒(紫外法)其检测原理是血清或血浆等样品H2O2在240nm处有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过H2O2，使待测溶液吸光度随反应时间而减少，通过紫外分光光度计检测240nm处吸光度，根据测定吸光度的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。紫外法又称紫外分光光度计发或紫外吸收法，该酶的检测对于研究植物代谢强度及抗旱、抗病能力有一定的价值。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

产品组成：

自备材料：

1、 蒸馏水、生理盐水

2、 比色杯

3、 分光光度计

4、 低温离心机

操作步骤(仅供参考)：

1、 配制CAT Assay buffer工作液：按 CAT Assay buffer(2.5×)：蒸馏水=1.5：1的比例稀释，即获得CAT Assay buffer工作液，4℃预冷，待用。

2、 配制100mM H2O2基液：本试剂盒提供的H2O2基液中的H2O2浓度约为1M。由于过氧化氢不是非常稳定，使用前需自行测定过氧化氢的实际浓度。把浓度约为1M的H2O2基液用CAT Assay buffer工作液稀释100倍，使H2O2基液中的H2O2浓度约为10mM。分光光度计测定A240，H2O2浓度(mM)=22.94×A240。而计算出本试剂盒提供的H2O2基液中的H2O2的实际浓度。然后再根据实际的过氧化氢浓度，配制100mMH2O2基液。

3、 准备样品：

细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行裂解，可以采用Leagene Western及IP细胞裂解液。如为植物样品或动物组织样品可按下列步骤操作。

   a、取植物样品0.4-0.5g或动物组织样品，加入预冷的CAT Assay buffer工作液2ml，研磨匀浆，转移至15ml离心管。再用CAT Assaybuffer工作液冲洗研磨器，合并冲洗液至该离心管，补加CAT Assay buffer工作液至10ml刻度。

   b、混匀，4℃冰箱中静置10min，转移离心管上部的清液至新的离心管中，

   c、4500g离心15min，上清液即为过氧化氢酶提取液。-70℃冻存，用于CAT的检测。

血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备，用生理盐水10倍稀释后，可以直接用于本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-70℃冻存，亦可4℃短期保存，用于CAT的检测。

高活性样品：如果样品中含有较高活性的CAT，可以使用CAT Assay buffer工作液稀释。

(选做)样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的CAT含量。

4、 CAT检测：按照下表设置空白管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测需要设置平行复测管。

5、加入100mM H2O2基液 30ml，每加完一管立即计时，并迅速倒入石英比色皿中，在240nm下测定吸光度，每隔1min读数1次，共测4次，待全部测定完毕后，计算酶活力。

蒸馏水调零，读取各管吸光度值。一般应数小时内检测完毕。

注意事项：

待测样品中不能含有CAT抑制剂，同时需避免反复冻融。

CAT Assay buffer如果出现浑浊或絮状物，应弃用。

完整的红细胞以及未稀释的溶血液中的过氧化氢酶置于4℃一周仍然很稳定，稀释后的溶血液中CAT容易失活。

尽量避免冰冻样品造成溶血，否则过氧化氢酶活性会下降10%-15%。

血清样品室温下3天内活性下降64.7%，4℃下下降10.5%，-20℃保存30天活性仅下降3.5%。因此，待测样品均应-20℃或-70℃保存。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：12个月有效。